一、细胞培养条件

细胞名称：RFL-6大鼠成纤维细胞

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系： DMEM + 10% FBS + 1% 双抗

传代方法：建议初次传代比例为1:2，每2天更换培养基

备注：使用无菌离心管收集培养基以进行过渡对比，如果效果不佳，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，培养至良好状态后，灌满完全培养液并封好瓶口为最佳运输方式。用75%酒精喷洒整个细胞瓶，在超净台内进行无菌操作，随后将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态。用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（建议40x, 100x, 200x各一张）。前三天拍摄的照片为重要售后依据，若未提供照片则默认收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞汇合度低于80%，应收集培养液至离心管，保留5ml培养基在37℃、5% CO2孵箱中培养；若超过80%，请进行传代，具体步骤如下：

弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS清洗细胞1-2次。
加入约1-2ml 0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞情况，随后加5ml完全培养基终止消化。
轻轻吹打细胞使其完全脱落，吸出悬液并转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟，弃去上清，重悬在1-2ml完全培养基中。
按1:2比例分瓶传代（两瓶T25），补充5-8ml完全培养基，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃掉培养液，用PBS清洗细胞一次。
加入约1ml 0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞变化，待细胞收缩后加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打使其脱落，转移到15ml离心管中并1000RPM离心5分钟。
弃上清，加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管。
将冻存细胞直接放入-80℃冰箱保存，若后期要转入液氮罐，需先在-80℃冰箱中存放24小时以上。

c. 细胞复苏

从液氮中取出细胞冻存管（佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴解冻，直至无结晶，外壁用75%的酒精消毒。
将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
弃去上清，重悬于5ml完全培养基中，再接种至T25培养瓶，置于37℃、5% CO2细胞培养箱中。
第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

有些细胞在运输过程中可能会脱落，这是正常现象。若脱落较多，可将所有培养液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，收集上清作过渡培养。然后加入胰酶消化1-2分钟，终止反应后重新离心并重悬，按1:2比例进行分瓶传代。

五、售后条款

尊龙凯时提供优质服务，关于细胞出现问题，可重发的情况包括但不限于：

运输中造成的细胞丢失、瓶身破损、培养液漏液等问题。
细胞污染，需在收到产品48小时内提供实验结果。
常温发货后未存活的细胞需提供真实的细胞状态照片。

细胞出现问题的情况下，不予以重发的情形包括客户造成的污染、错误操作、非推荐培养体系等。请在收到细胞后及时处理并反馈相关信息。